۳-۳- زمان انجام آزمایشات………………………………………………………………………………………………………………………….. ۳۷
۳-۴-محدودیت ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………. ۳۷
۳-۴- ملاحظات اخلاقی………………………………………………………………………………………………………………………………… ۳۷
۳-۶-مواد و روش ها…………………………………………………………………………………………………………………………………….. ۳۷
۳-۶-۱-وسایل و دستگاه های مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………. ۳۷
۳-۶-۲-مواد و داروهای مورد استفاده…………………………………………………………………………………………………………… ۳۸
۳-۸- دستگاه بررسی حافظه( Step-Through)………………………………………………………………………………………….. 39
۳-۹- حیوانها………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. ۴۰
۳-۱۰- مراحل جراحی…………………………………………………………………………………………………………………………………… ۴۰
۳-۱۱- تزریق درون مغزی دارو…………………………………………………………………………………………………………………….. ۴۵
۳-۱۲- تستهای رفتاری………………………………………………………………………………………………………………………………… ۴۶
۳-۱۲-۱ مرحله آموزش………………………………………………………………………………………………………………………………… ۴۶
۳-۱۲-۲- مرحله آزمون یا بررسی حافظه…………………………………………………………………………………………………….. ۴۷
۳-۱۳- تیمار های دارویی و آزمایشهای انجام شده………………………………………………………………………………. ۴۸
۳-۱۳-۱- آزمایش شماره ۲: بررسی تاثیر تزریق پس از آموزش AM630 بر روی حافظه ی اجتنابی مهاری (نمودار Dose response)…………………………………………………………………………………………………………………………….. 48
۳-۱۳-۲- آزمایش شماره ۳: بررسی تاثیر تزریق پس از آموزش GP1a بر روی حافظه ی اجتنابی مهاری (نمودار Dose response)…………………………………………………………………………………………………………………………….. 49
۳-۱۳-۳- آزمایش شماره ۱: بررسی تاثیر تزریق پس از آموزش D-AP5 بر روی حافظه ی اجتنابی مهاری (نمودار Dose response)……………………………………………………………………………………………………………………………… 49
۳-۱۳-۴- آزمایش شماره ۴: بررسی تاثیر تزریق دوز غیر موثرAM630 بر حافظه موشهای تیمار شده با D-AP5…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 50
۳-۱۳-۵- آزمایش شماره ۵: بررسی تاثیر تزریق دوز غیر موثرGP1a بر حافظه موش های تیمار شده با D-AP5…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 50
فصل چهارم : نتایج
۴-۱- بررسی تاثیر تزریق پس از آموزشD-AP5 بر روی حافظه اجتنابی مهاری…………………………………….. ۵۴
۴-۲- بررسی تاثیر تزریق پس از آموزشAM630 بر روی حافظه اجتنابی مهاری……………………………………. ۵۶
۴-۳- بررسی تاثیر تزریق پس از آموزشGP1a بر روی حافظه اجتنابی مهاری……………………………………………۵۸
۴-۴- بررسی تاثیر تزریق پس از آموزشAM630 برحافظه موش های تیمار شده با D-AP5………………………60
۴-۵- بررسی تاثیر تزریق پس از آموزشGP1a بر روی حافظه موشهای تیمار شده با D-AP5…………………61
فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری
۵-۱- سیستم گلوتاماتارژیک در هیپوکامپ و اهمیت آن درتثیبت حافظه……………………………………………………۶۵
۵-۲-سیستم کانابینوئیدی و اهمیت آن درتثبیت حافظه……………………………………………………………………………… ۶۷
۵-۳-بررسی تداخل سیستم کانابینوئیدی و سیستم گلوتاماتی در تثبیت حافظه……………………………………….. ۶۸
نتیجه گیری…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ۷۰
پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………… ۷۲
خلاصه انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………..۷۳
منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………۷۴
خلاصه فارسی
یادگیری و حافظه از جمله مکانیسم های پیچیده مغزی هستند که مسیر های نورونی مختلفی در ایجاد و تثبیت آنها نقش دارد. بر اساس پژوهش های انجام شده سیستم وابسته به گلوتامات در ناحیه ی هیپوکامپ مغز در ایجاد حافظه موثر بوده و همچنین سیستم کانابینوییدی در این ناحیه در مسیر های مرتبط با حافظه دخیل هستند. در این پژوهش ما به بررسی اثر سیستم کانابینوییدی از طریق گیرنده CB2 بر روی حافظه تخریب شده ناشی از آنتاگونیست گیرنده NMDA (D-AP5 ) درناحیه CA1 هیپوکامپ موش صحرایی نر نژاد ویستار می پردازیم. برای بررسی حافظه موش ها از روش بررسی اجتنابی مهاری (غیر فعال) با مدل step-throug استفاده شده و حافظه موش ها ۲۴ ساعت پس از آموزش مورد بررسی قرار گرفته است.نتایج حاصل از این پژوهش نشان میدهد که تزریق درون مغزی(ICV,Intra-CA1) D-AP5 (µg/rat 0.5 & 0.75) موجب تخریب حافظه شده و همچنین تزریق درون مغزی آنتاگونیست اختصاصی گیرنده CB2 (AM630) به صورت وابسته به دوز(ng/rat 100)موجب ایجاد فراموشی میگردد. در صورتی که تزریق درون مغزی GP1a 50,75,100 & 125 ng/rat))- آگونیست اختصاصیCB2 - تغییر معنا داری درتثیبت حافظه ایجاد نکرده است. تزریق دوز(۵۰ng/rat) AM630 و همچنین دوز غیر موثر GP1a ( (50ng/rat پنج دقیقه پیش از دوزهای موثر D-AP5 ( (0.75 and 0.50µg/rat توانستند اثر تخریب حافظه D-AP5 را بلوکه کند.با این وجود تزریق دوز غیر موثر ۵۰ng/µL ) AM630) وهمچنین دوز غیر موثر GP1a( (50ng/rat پنج دقیق پیش ازD-AP5 (µg/rat 0.25 ) تغییر معنا داری در حافظه موش ها ایجاد نکرد.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

نتایج حاصل از این پژوهش نشان داد که هم آگونیست و هم آنتاگونیست گیرندهCB2 قادر به اصلاح فراموشی ناشی از D-AP5 هستند و این مسئله شاید نشان دهنده اثر تعدیل کنندگی گیرنده CB2 باشد.همچنین می توان بیان داشد که احتمالا بین سیستم کانابینوئیدی و سیستم گلوتاماتی در ناحیه CA1 تداخل وجود دارد.
۱
فصل اول :
کلیات
۱-۱.ضرورت و اهمیت موضوع
صد سال پس از توصیف بیماری آلزایمربرای اولین بار ، این بیماری هنوز به عنوان یکی از مهمترین و ناتوان کننده ترین مشکلات سلامتی جوامع شناخته می شود . بیماری آلزایمر از جمله مهم ترین علل فراموشی است در حالی که بیماری های دیگری مثل مشکلات عروقی مغزی،فرموشی Lewy bodyو فراموشی Frontotemporal و همچنین بیماری هایی مثل هانتینگتون ، پارکینسون و آسیب های ناشی از ضربات به مغز نیزمیتوانند از عوامل فراموشی باشند. بررسی های انجام شده در سال ۲۰۰۵ نشان می دهد که۳/۲۴ میلیون نفر در جهان دچار فراموشی هستند.که به این رقم هر سال ۶/۴ میلیون مورد اضافه می شود(یک مورد جدید در هر ۷ ثانیه). هر بیست سال این تعداد دو برابر می شود تا در سال ۲۰۴۰ به مقدار ۱/۸۱ میلیون می رسد[۴, ۵].
با توجه به آمار رو به رشد فراموشی و بیماری های مرتبط با آن ،تلاش در جهت شناسایی مکانیسم ها و مسیر های مرتبط با تشکیل حافظه و ایجاد فراموشی می تواند در مسیر یافتن درمان وهمچنین پیشگیری از این بیماری ها راه گشا باشد.
۱-۲-بیان مسئله
گلوتامات مهمترین انتقال دهنده عصبی تحریکی و همچنین فراوان ترین آمینو اسید در رژیم غذایی می باش[۶].گیرنده های NMDA از یک کمپلکس چهار قسمتی تشکیل شده که دارای ساختار های همولوگ متعدد است. این گیرنده در فرم های متعددی از حافظه و یادگیری تاثیر مهمی دارد[۷]. به نظر میرسد که انعطاف پذیری نورونی در ناحیهCA1 عمدتا مربوط به گیرنده NMDA است[۸].ارتباط انعطاف پذیری نورونی با حافظه و یادگیری یکی از یافته های بزرگ نوروشیمیایی است و اساس حافظه و یادگیری شناخته میشود.(Hebbian theory)
سیناپس های وابسته به NMDA نقش حیاتی را در القای Long term potentiation(LTP) (تغییر سیناپسی که می تواند موجب ایجاد نوعی از حافظه بلند مدت شود)دارد[۹] ماده D-AP5 یک آنتاگونیست گیرندهNMDA است که برای ایجاد فراموشی و بررسی سیستم های وابسته به گلوتامات استفاده می شود[۱۰].
گیرنده های کانابینوئیدی به دو صورت CB1وCB2 در بدن وجود دارند که هدف اصلی مشتقات کانابیس(که سر دسته آنها تترا هیدرو کانابینون می باشد)هستن [۱۱] . پژوهش های پیشین تایید می کردند که گیرنده CB1 در مغز و گیرنده های CB2در سلول های محیطی و ایمنی و خونی بیان می شوند. در صورتی که مطالعات اخیر حاکی از بیان گیرنده CB2 هر چند به مقدار کمتر از CB1 در مغز است[۱۲]. مطالعات نشان می دهند که گیرنده CB2 از طریق مهار تولید بتا آمیلوئید از پیشروی بیماری آلزایمر جلوگیری می کند.همچنین در بررسی دیگری مشخص شده که تحریک گیرنده CB1 در ناحیه CA1 هیپوکامپ موجب مهار گلوتامات می گردد[۱۳،۱۴]. از آنجا که بسیاری از عملکرد های گیرنده های CB1 و CB2 مشترک هستند .در این مطالعه ما با بهره گرفتن از آنتاگونیست گلوتامات (D-AP5)و فراموشی ناشی از آن اثر سیستم کانابینوئیدی را بررسی می کنیم.
۱-۳- اهداف مطالعه
۱-۳-۱-هدف اصلی
بررسی اثر سیستم کانابینوئیدی برروی نورون های وابسته به گلوتامات از طریق اثر گیرنده CB2 بر فراموشی ناشی از آنتاگونیست گیرنده کانابینوئید(D-AP5)