Distilled water: 500cc
۲-۶-۳ روش استخراج سرم:
لوله های کلات حاوی خون، داخل دستگاه سانتریفیوژ قرار داده و به مدت ۱۰ دقیقه با دور۲۰۰G در دقیقه سانتریفوژ شدند. سپس توسط سمپلر، سرم جدا شده خون را برداشته و در لوله های اپندورف ریخته شد. سرم ها تا زمان انجام آزمایشات هورمونی در حالت فریز (دمای ۲۰- درجه سانتیگراد ) نگهداری شدند.
۲-۷ روش اندازه گیری هورمون تستوسترون:
این اندازه گیری توسط دستگاه Elecsysمدل ۲۰۱۰ انجام شد. پس از جدا سازی سرم آنهه را در cup های مخصوص دستگاه ریخته و نتایج توسط دستگاه خوانده شد.
۲-۸ پاساژ (Passage) یا گردش بافتی ( Processing)
از بافت بیضه چپ، طی مراحل زیر اسلاید تهیه شد:
الف) مرحله تثبیت: بافت های فوق در فرمالین ۱۰% فیکس شد و با فاصله ۲، ۴، ۸، ۱۲، ۲۴، ۴۸ ساعت از نقطه شروع، فرمالین آنها تعویض شد. مقدار فرمالین استفاده شده برای هر ظرف ۵۰ برابر حجم بافت بود.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

ب) مرحله آب گیری (Dehydration): این عمل با الکل های ۷۰، ۸۰، ۹۶ وسه ظرف الکل ۱۰۰درصد، هر کدام به مدت ۲ ساعت انجام شد.
پ) مرحله الکل گیری و شفاف کردن(Clearing): برای این منظور از دو ظرف گزیلل-زیلول)، هر کدام به مدت یک ساعت استفاده شد تا گزیلل-زیلول جانشین الکل شود. شایان ذکر است که دو مرحله اخیر توسط دستگاه اتوتکنیکون لایکا (LEICA TP 1010) به طور اتوماتیک انجام شد.
ت) مرحله جایگزینی: بافت ها در دو ظرف پارافین مذاب با درجه حرارت ۶۵ درجه سانتی گراد و با حجمی معادل ۵۰ برابر حجم نمونه بافتی، قرار داده شده تا پارافین جایگزین گزیلل =زیلول شود مدت زمان در نظر گرفته شده برای هر ظرف ۲ ساعت بود.
ث) مرحله قالب گیری: ابتدا یک لایه نازک از پارافین مذاب بر روی شیشه و قالب های روی آن چسبانده شد، سپس قالب ها را با پارافین مذاب پر کرده و بافت ها را در داخل آنها قرار داده شد پس از سرد شدن در دمای اتاق، بلوک ها را از قالب ها جدا کرده و در سرد خانه یخچال نگهداری شدند.
ج) برش بافتی یا مقطع گیری: برای این منظور از میکروتوم لایکا استفاده شد و برش های ۵ میکرونی از بافت تهیه شد.
چ)مرحله رنگ آمیزی: در این مطالعه از رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین،(H&E ) استفاده شد.
۲-۹ شمارش اسپرم:
برای شمارش اسپرم ابتدا یک سانتیمتر انتهایی مجران دفران را جدا کرده و در ۵/۲ سی سی محلول HBSS با حرارت ۳۷ درجه سانتی گراد قرار داده شد سپس به روش Jennifer (51)، یک قطره از محلول فوق را روی لام نئوبار ریخته و پس از قرار دادن لامل روی آن از خانه های شماره، ۹،۷،۳،۱(خانه های مربوط به شمارش گلبول سفید) جهت شمارش اسپرم استفاده شد. پس از شمارش، میانگین اعداد حاصل از خانه های مزبور محاسبه گردید. به منظور محاسبه تعداد اسپرم موجود در یک میلی لیتر محلول HBSS، میانگین به دست آمده در ضرایب زیر ضرب گردید:
با توجه به اینکه عمق لام نئوبار ۰.۱ میلی لیتر می باشد جهت محاسبه تعداد اسپرم در یک میلی لیتر مکعب، میانگین تعداد اسپرم در عدد ۱۰ ضرب شد. همچنین جهت محاسبه تعداد اسپرم در واحد میلی لیتر، تعداد اسپرم به دست آمده در یک میلی متر مکعب در عدد ۱۰۰۰ ضرب گردید. با توجه به اینکه مجرای دفران در ۵/۲ سی سی (فاکتور رقت) محلول HBSS قرار داده شده بود عدد حاصله در عدد ۵/۲ ضرب گردید.
۲-۱۰ روش رنگ آمیزی اسمیر های تهیه شده از اسپرم:
اسمیر های تهیه شده توسط رنگ ائوزین، رنگ آمیزی شدند.
۲-۱۱ مواد و وسایل
جدول ۲-۱: لیست وسایل مصرفی